Mga produkto
Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR Detection kit para sa 2019-nCoV
Gipaabot nga paggamit
Kini nga kit gigamit para sa qualitative detection sa bag-ong coronavirus (2019-nCoV) gamit ang throat swabs, nasopharyngeal swabs, bronchoalveolar lavage fluid, sputum. ebidensya alang sa klinikal nga pagdayagnos ug pagtambal.Ang usa ka komprehensibo nga pagtuki sa kondisyon girekomenda sa kombinasyon sa mga klinikal nga pagpakita sa pasyente ug uban pang mga pagsulay sa laboratoryo.
Prinsipyo sa inspeksyon
Ang kit gibase sa usa ka lakang nga RT-PCR nga teknolohiya.Sa tinuud, ang 2019 nga bag-ong coronavirus (2019-nCoV) nga ORF1ab ug N nga mga gene gipili ingon mga target nga rehiyon sa amplification.Ang piho nga mga primer ug fluorescent probes (N gene probes gimarkahan sa FAM ug ORF1ab probes gimarkahan og HEX) gidesinyo aron mahibal-an ang 2019 nga bag-ong tipo nga coronavirus RNA sa mga sample.Ang kit naglakip usab sa endogenous internal control detection system (internal control gene probe nga gimarkahan og CY5) aron mamonitor ang proseso sa pagkolekta sa sample, RNA ug PCR amplification, sa ingon makunhuran ang sayop nga negatibong resulta.
Pangunang mga sangkap
| Mga sangkap | Tomo(48T/Kit） |
| Reaksyon nga solusyon sa RT-PCR | 96µl |
| nCOV primer TaqMan probemixture（ORF1ab,N Gene,RnaseP Gene） | 864µl |
| Negatibo nga pagkontrol | 1500µl |
| Positibo nga kontrobersiya sa nCOV(l ORF1ab N Gene) | 1500µl |
Kaugalingong reagents: RNA extraction o purification reagents.Negatibo/positibo nga pagkontrol: Ang positibo nga kontrol mao ang RNA nga adunay target nga tipik, samtang ang negatibo nga kontrol mao ang nucleic acid-free nga tubig.Atol sa paggamit, sila kinahanglan nga moapil sa pagkuha ug kinahanglan nga isipon nga makatakod.Kinahanglang dumalahon ug ilabay sila subay sa may kalabutan nga mga regulasyon.
Ang internal nga reference gene mao ang human RnaseP gene.
Mga kondisyon sa pagtipig ug petsa sa pag-expire
-20±5 ℃, likayi ang balikbalik nga pagyelo ug pagtunaw labaw pa sa 5 ka beses, balido sulod sa 6 ka bulan.
Magamit nga instrumento
Uban sa FAM / HEX / CY5 ug uban pang multi-channel fluorescent PCR instrument.
Mga kinahanglanon sa espesimen
1.Aplikable nga mga tipo sa ispesimen: throat swabs, nasopharyngeal swabs, bronchoalveolar lavage fluid, sputum.
2. Pagkolekta sa espesimen (aseptic technique)
Pharyngeal swab: Pahiran ang tonsil ug posterior pharyngeal wall gamit ang duha ka swab sa samang higayon, dayon ituslob ang swab head sa test tube nga adunay sampling solution.
Sputum: Human ang pasyente adunay lawom nga ubo, kuhaa ang ubo nga plema sa usa ka screw cap test tube nga adunay sulud nga sampling solution;bronchoalveolar lavage fluid: Pag-sampol sa mga medikal nga propesyonal.3.Storage ug transportasyon sa mga sample
Ang mga espesimen alang sa pagkahimulag sa virus ug pagsulay sa RNA kinahanglan nga sulayan sa labing madali.Ang mga specimen nga makit-an sulod sa 24 ka oras mahimong tipigan sa 4 ℃;kadtong dili makit-an sulod sa 24
oras kinahanglan nga gitipigan sa -70 ℃ o sa ubos (kon walay storage kondisyon sa -70 ℃, sila kinahanglan nga
temporaryo nga gitipigan sa -20 ℃ refrigerator).Ang mga specimen kinahanglan nga maglikay sa balik-balik nga pagyelo ug pagtunaw sa panahon sa transportasyon.Ang mga specimen kinahanglan ipadala sa laboratoryo sa labing dali nga panahon pagkahuman sa pagkolekta.Kung ang mga sample kinahanglan nga dad-on sa layo nga distansya, girekomenda ang pagtipig sa uga nga yelo.
Mga Pamaagi sa Pagsulay
1 Sample nga pagproseso ug RNA extraction (sample processing area)
Kini girekomendar sa pagkuha sa 200μl sa liquid sample alang sa RNA pagkuha.Para sa may kalabutan nga mga lakang sa pagkuha, tan-awa ang mga instruksyon sa komersyal nga RNA extraction kits.Parehong negatibo ug negatibo
Ang mga kontrol niini nga kit nalangkit sa pagkuha.
2 PCR reagent nga pag-andam (reagent preparation area)
2.1 Kuhaa ang tanang sangkap gikan sa kit ug tunawon ug isagol sa temperatura sa lawak.Centrifuge sa 8,000 rpm sulod sa pipila ka segundo sa dili pa gamiton;kuwentaha ang gikinahanglan nga gidaghanon sa mga reagents, ug ang sistema sa reaksyon giandam sama sa gipakita sa mosunod nga lamesa:
| Mga sangkap | N pagsilbi (25µl system) |
| nCOV primer TaqMan probemixture | 18 µl × N |
| Reaksyon nga solusyon sa RT-PCR | 2 µl × N |
| *N = gidaghanon sa mga sample nga nasulayan + 1 (negatibong kontrol) + 1 (nCOVpositibo nga pagkontrol) | |
2.2 Human sa hingpit nga pagsagol sa mga sangkap, centrifuge sa usa ka mubo nga panahon sa pagtugot sa tanan nga mga likido sa tube bungbong mahulog ngadto sa ubos sa tube, ug dayon aliquot ang 20 μl amplification system ngadto sa PCR tube.
3 Sampling (lugar sa pag-andam sa espesimen)
Idugang ang 5μl sa negatibo ug positibo nga mga kontrol pagkahuman sa pagkuha.Ang RNA sa sample nga sulayan idugang sa PCR reaction tube.
Hugot nga takpan ang tubo ug i-centrifuge sa 8,000 rpm sulod sa pipila ka segundo sa dili pa kini ibalhin ngadto sa amplification detection area.
4 PCR amplification (gipadako nga detection area)
4.1 Ibutang ang reaction tube sa sample cell sa instrumento, ug ibutang ang mga parameter sama sa mosunod:
| entablado | Siklo numero | Temperatura(°C) | Panahon | koleksyonsite |
| Baliktadtranskripsyon | 1 | 42 | 10 min | - |
| Pre-denaturationn | 1 | 95 | 1 min | - |
| Siklo | 45 | 95 | 15s | - |
| 60 | 30s | pagkolekta sa datos |
Pagpili sa channel sa pagkakita sa instrumento: Pilia ang FAM, HEX, CY5 nga channel alang sa fluorescence signal.Para sa pakisayran nga fluorescent WALA, palihug ayaw pilia ang ROX.
5 Pag-analisa sa resulta (Palihug tan-awa ang mga instruksyon sa eksperimento sa matag instrumento para sa setting)
Human sa reaksyon, i-save ang mga resulta.Human sa pag-analisar, i-adjust ang sinugdanan nga bili, katapusan nga bili, ug threshold nga bili sa baseline sumala sa hulagway (ang user mahimong mag-adjust sumala sa aktwal nga sitwasyon, ang pagsugod nga bili mahimong ibutang sa 3 ~ 15, ang katapusan nga bili mahimong ibutang sa 5~20, adjustment) sa logarithmic graph Sa threshold sa bintana, ang threshold line naa sa logarithmic phase, ug ang amplification curve sa negatibong kontrol usa ka tul-id nga linya o ubos sa threshold line).
6 Quauty control（Usa ka procedural control gilakip sa pagsulay） Negatibo nga kontrol: Walay klaro nga amplification curve para sa FAM, HEX, CY5 detection channelsn
COV positibo nga pagkontrol: dayag nga amplification curve sa FAM ug HEX detection channels, Ct value≤32, apan walay amplification curve sa CY5 channel;
Ang mga kinahanglanon sa ibabaw kinahanglan nga matuman dungan sa parehas nga eksperimento;kung dili, ang eksperimento dili balido ug kinahanglan nga balikon.
7 Determinasyon sa mga resulta.
7.1 Kung walay amplification curve o Ct value> 40 sa FAM ug HEX channels sa test sample, ug adunay amplification curve sa CY5 channel, mahukman nga walay 2019 new coronavirus (2019-nCoV) RNA sa sample;
.2 Kung ang test sample adunay dayag nga amplification curves sa FAM ug HEX channels, ug ang Ct value kay ≤40, mahukman nga ang sample positibo sa 2019 new coronavirus (2019-nCoV).
7.3 Kung ang sample sa pagsulay adunay usa ka tin-aw nga kurba sa amplification lamang sa usa ka channel sa FAM o HEX, ug ang kantidad sa Ct mao ang ≤40, ug wala’y kurba sa amplification sa pikas channel, ang mga resulta kinahanglan nga sulayan pag-usab.Kung ang mga resulta sa retest makanunayon, ang sample mahimong mahukman nga positibo alang sa bag-o
coronavirus 2019 (2019-nCoV).Kung negatibo ang resulta sa retest, mahukman nga negatibo ang sample sa 2019 new coronavirus (2019-nCoV).
Positibo nga bili sa paghukom
Ang ROC curve nga pamaagi gigamit aron mahibal-an ang reference CT value sa kit ug ang internal control reference value mao ang 40.
Paghubad sa mga resulta sa pagsulay
1.Ang matag eksperimento kinahanglan nga sulayan alang sa negatibo ug positibo nga mga kontrol.Ang mga resulta sa pagsulay matino lamang kung ang mga kontrol nakab-ot ang mga kinahanglanon sa pagkontrol sa kalidad
2. Sa diha nga ang FAM ug HEX detection channels positibo, ang resulta gikan sa CY5 channel (internal control channel) mahimong negatibo tungod sa sistema sa kompetisyon.
3. Kung negatibo ang resulta sa internal control, kung negatibo usab ang FAM ug HEX detection channels sa test tube, , kini nagpasabot nga ang sistema nabaldado o ang operasyon sayop, t ang pagsulay dili balido.Busa, ang mga sampol kinahanglan nga sulayan pag-usab.
